一、標(biāo)準(zhǔn)概述

吡啶類(lèi)農(nóng)藥是一類(lèi)含有吡啶雜環(huán)結(jié)構(gòu)的有機(jī)化合物，因具有高效、低毒、對(duì)人和生物有良好的環(huán)境相容性等特點(diǎn)，被廣泛用作稻谷和小麥的除草劑、殺菌劑和殺蟲(chóng)劑。其中，吡蟲(chóng)啉、啶蟲(chóng)脒等品種是全球用量最大的新煙堿類(lèi)殺蟲(chóng)劑之一。然而，吡啶類(lèi)農(nóng)藥的廣泛使用也帶來(lái)了殘留風(fēng)險(xiǎn)，各國(guó)紛紛在GB 2763《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》中對(duì)其設(shè)定了嚴(yán)格的限量要求。

GB 23200.50-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中吡啶類(lèi)農(nóng)藥殘留量的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》 是由中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)、農(nóng)業(yè)部、國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局聯(lián)合發(fā)布的一項(xiàng)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。該標(biāo)準(zhǔn)于2016年12月18日發(fā)布，2017年6月18日正式實(shí)施。

該標(biāo)準(zhǔn)代替SN/T 2561-2010《進(jìn)出口食品中吡啶類(lèi)農(nóng)藥殘留量的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》 。與舊版相比，主要變化包括：標(biāo)準(zhǔn)文本格式修改為食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)文本格式；標(biāo)準(zhǔn)名稱中“進(jìn)出口食品"改為“食品"；標(biāo)準(zhǔn)范圍中增加“其它食品可參照?qǐng)?zhí)行"。

該標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中吡蟲(chóng)啉、啶蟲(chóng)脒、咪唑乙煙酸、氟啶草酮、啶酰菌胺、噻唑煙酸和氟硫草定等7種吡啶類(lèi)農(nóng)藥殘留量檢測(cè)的制樣和液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測(cè)定方法。標(biāo)準(zhǔn)適用于大米、小麥、土豆、菠菜、柑橘、核桃仁、茶葉、豬肉、魚(yú)肉、豬肝和牛奶中上述7種農(nóng)藥殘留量的測(cè)定和確證，其它食品可參照?qǐng)?zhí)行。

二、方法原理

GB 23200.50-2016所采用的核心技術(shù)是液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry, LC-MS/MS）。其基本原理可概括為以下步驟：

第一步：提取——試樣中的目標(biāo)農(nóng)藥用乙腈提取，同時(shí)加入氯化鈉進(jìn)行鹽析。鹽析效應(yīng)可降低目標(biāo)物在水相中的溶解度，促進(jìn)其向乙腈層分配，從而提高提取效率。

第二步：凈化——提取液經(jīng)石墨化炭黑（GCB）或C18固相萃取小柱凈化。石墨化炭黑可有效吸附去除樣品中的色素等干擾物質(zhì)；C18柱則可去除脂肪等非極性雜質(zhì)。

第三步：色譜分離——凈化后的樣品溶液注入液相色譜系統(tǒng)，以C18反相色譜柱進(jìn)行分離，目標(biāo)物在色譜柱上按照極性差異實(shí)現(xiàn)逐一分離。

第四步：質(zhì)譜檢測(cè)與確證——分離后的各化合物依次進(jìn)入串聯(lián)質(zhì)譜儀，采用電噴霧電離（ESI）技術(shù)離子化，以多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式采集數(shù)據(jù)。MRM模式通過(guò)選擇特定的母離子→子離子對(duì)進(jìn)行監(jiān)測(cè)，大幅提升了檢測(cè)的選擇性和靈敏度，可同時(shí)實(shí)現(xiàn)定量測(cè)定和定性確證。

第五步：定量——采用外標(biāo)法定量，通過(guò)比較樣品中各目標(biāo)物峰的響應(yīng)值與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量計(jì)算。

這一方法的核心優(yōu)勢(shì)在于液相色譜的高分離能力與串聯(lián)質(zhì)譜的高選擇性確證能力的有機(jī)結(jié)合：液相色譜可將結(jié)構(gòu)相似的吡啶類(lèi)農(nóng)藥逐一分離，串聯(lián)質(zhì)譜則通過(guò)特征離子對(duì)提供準(zhǔn)確的結(jié)構(gòu)信息，兩者聯(lián)用實(shí)現(xiàn)了復(fù)雜食品基質(zhì)中7種目標(biāo)物的同步定性與定量。

三、試劑與材料

標(biāo)準(zhǔn)對(duì)實(shí)驗(yàn)用試劑和材料有嚴(yán)格規(guī)定，這是保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的基礎(chǔ)。

用水要求：實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。一級(jí)水是最高純度的實(shí)驗(yàn)用水，電阻率通常不低于18.2 MΩ·cm，可有效避免水中雜質(zhì)對(duì)痕量分析的干擾。

試劑純度：除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純。其中，乙腈和甲醇應(yīng)為液相色譜級(jí)。

主要試劑：

溶液配制：

·         0.1%乙酸溶液：取1 mL乙酸，用水稀釋并定容至1000 mL

·         甲醇-水（1+1，V/V） ：量取100 mL甲醇，加入100 mL水，混勻

·         甲苯-乙腈酸性溶液：量取100 mL甲苯，加入300 mL乙腈和4 mL乙酸，混勻備用

標(biāo)準(zhǔn)品：吡蟲(chóng)啉、啶蟲(chóng)脒、咪唑乙煙酸、氟啶草酮、啶酰菌胺、噻唑煙酸和氟硫草定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，純度≥98%。

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：將各標(biāo)準(zhǔn)品用適當(dāng)溶劑溶解，配制成標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液和系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

四、儀器與設(shè)備

標(biāo)準(zhǔn)要求配備以下核心設(shè)備：

其中，石墨化炭黑（GCB）固相萃取小柱是該方法的特色凈化材料。植物源食品（如菠菜、茶葉等）含有大量色素，常規(guī)凈化方法難以去除。石墨化炭黑對(duì)色素具有極強(qiáng)的吸附能力，可有效保障提取液的純凈度。

五、分析步驟

1. 試樣制備

不同食品基質(zhì)的試樣制備方式各異：

·         谷物類(lèi)（大米、小麥）：粉碎、過(guò)篩、混勻

·         果蔬類(lèi)（土豆、菠菜、柑橘）：勻漿處理

·         堅(jiān)果類(lèi)（核桃仁）：粉碎、混勻

·         茶葉：粉碎、過(guò)篩

·         動(dòng)物源性食品（豬肉、魚(yú)肉、豬肝）：勻漿處理

·         牛奶：充分混勻

2. 樣品前處理

前處理是該方法的關(guān)鍵環(huán)節(jié)：

·         稱樣：準(zhǔn)確稱取適量均勻樣品

·         提取：加入乙腈，勻漿或振蕩提取

·         鹽析：加入氯化鈉，促進(jìn)目標(biāo)物向乙腈層分配

·         脫水：加入無(wú)水硫酸鈉，去除提取液中殘留的水分

·         離心：高速離心使固形物沉淀

·         凈化：取乙腈層，經(jīng)石墨化炭黑或C18固相萃取小柱凈化

·         濃縮與定容：洗脫液經(jīng)氮吹濃縮后，用適當(dāng)溶劑定容

·         待測(cè)：定容液供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀分析

3. 色譜-質(zhì)譜分析

將處理好的樣品溶液注入液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，在優(yōu)化的色譜和質(zhì)譜條件下進(jìn)行分離、檢測(cè)和確證。通過(guò)對(duì)比樣品中目標(biāo)物的保留時(shí)間及MRM離子對(duì)豐度比與標(biāo)準(zhǔn)品的一致性進(jìn)行定性確認(rèn)，通過(guò)峰面積進(jìn)行定量測(cè)定。

4. 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

將7種農(nóng)藥的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液逐級(jí)稀釋成一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，分別進(jìn)樣測(cè)定，以濃度為橫坐標(biāo)、響應(yīng)值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5. 結(jié)果計(jì)算

根據(jù)樣品測(cè)定得到的響應(yīng)值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的濃度，再結(jié)合樣品稱樣量、定容體積等參數(shù)，計(jì)算樣品中各農(nóng)藥的實(shí)際殘留量。

六、方法學(xué)驗(yàn)證與質(zhì)量控制

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)研究文獻(xiàn)，該方法具有良好的分析性能。

回收率：7種吡啶類(lèi)農(nóng)藥的加標(biāo)回收率為72.1%～99.7%。

精密度：測(cè)定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD，n=6）為1.1%～6.8%。

質(zhì)量控制要求：

·         加標(biāo)回收率應(yīng)控制在70%～120%

·         相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）應(yīng)小于15%

·         定量限需滿足0.01 mg/kg要求

·         每批樣品分析時(shí)應(yīng)同時(shí)進(jìn)行空白試驗(yàn)和加標(biāo)回收試驗(yàn)

七、從行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的升級(jí)

GB 23200.50-2016代替SN/T 2561-2010，實(shí)現(xiàn)了從“進(jìn)出口"專用到“全行業(yè)"覆蓋的跨越。這一升級(jí)具有以下重要意義：

1. 標(biāo)準(zhǔn)性質(zhì)的提升：從出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（SN/T） 升級(jí)為食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB） ，檢測(cè)方法具有了法律強(qiáng)制力，成為食品安全監(jiān)管的執(zhí)法依據(jù)。

2. 適用范圍的擴(kuò)大：標(biāo)準(zhǔn)名稱中“進(jìn)出口食品"改為“食品"，不再區(qū)分內(nèi)銷(xiāo)與出口。

3. 普適性的增強(qiáng)：增加“其它食品可參照?qǐng)?zhí)行"的表述，為方法在其他食品基質(zhì)中的應(yīng)用提供了依據(jù)。

八、關(guān)鍵技術(shù)要點(diǎn)

1. 乙腈提取與鹽析的協(xié)同效應(yīng)

標(biāo)準(zhǔn)采用乙腈作為提取溶劑，配合氯化鈉鹽析。乙腈對(duì)吡啶類(lèi)農(nóng)藥具有良好的溶解性，同時(shí)對(duì)脂肪的溶解能力較弱。氯化鈉的加入增強(qiáng)了乙腈與水相的分層效果，使目標(biāo)物更充分地分配至乙腈層。

2. 石墨化炭黑凈化——色素去除的利器

菠菜、茶葉等植物源食品含有大量葉綠素等色素，常規(guī)C18柱難以有效去除。標(biāo)準(zhǔn)提供石墨化炭黑（GCB）固相萃取小柱作為凈化選擇，其對(duì)色素具有極強(qiáng)的吸附能力，可有效保障提取液的純凈度。

3. 質(zhì)譜確證——雙重保障定性準(zhǔn)確

與僅依靠保留時(shí)間的氣相色譜法不同，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法通過(guò)保留時(shí)間和MRM離子對(duì)豐度比雙重信息進(jìn)行定性確證，有效避免了假陽(yáng)性結(jié)果。

4. 無(wú)水硫酸鈉的預(yù)處理

標(biāo)準(zhǔn)要求無(wú)水硫酸鈉經(jīng)650℃灼燒4 h后使用。高溫灼燒可去除吸附的水分和有機(jī)雜質(zhì)，確保其脫水效果和純度。

5. 前處理過(guò)程較為復(fù)雜的現(xiàn)實(shí)

值得注意的是，有文獻(xiàn)指出GB 23200.50-2016測(cè)定時(shí)前處理過(guò)程較為復(fù)雜。標(biāo)準(zhǔn)采用固相萃取法對(duì)樣品進(jìn)行前處理，操作較為費(fèi)時(shí)。為此，已有研究者開(kāi)發(fā)了QuEChERS-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法作為簡(jiǎn)化方案，并將方法學(xué)參數(shù)與GB 23200.50-2016進(jìn)行對(duì)照，取得了滿意結(jié)果。這一現(xiàn)狀提示檢測(cè)人員在實(shí)際應(yīng)用中可根據(jù)樣品基質(zhì)和實(shí)驗(yàn)室條件，在確保方法學(xué)驗(yàn)證通過(guò)的前提下，探索更高效的前處理方案。

九、方法優(yōu)勢(shì)與應(yīng)用價(jià)值

GB 23200.50-2016所規(guī)定的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法具有以下顯著優(yōu)勢(shì)：

1. 高通量、高效率：該方法可在一次進(jìn)樣中同時(shí)完成7種吡啶類(lèi)農(nóng)藥的定性和定量分析，大幅提升了檢測(cè)效率。

2. 確證能力強(qiáng)：串聯(lián)質(zhì)譜的MRM模式可提供化合物的特征離子對(duì)信息，定性確證能力顯著增強(qiáng)，有效避免了假陽(yáng)性結(jié)果。

3. 適用范圍廣：標(biāo)準(zhǔn)適用于大米、小麥、土豆、菠菜、柑橘、核桃仁、茶葉、豬肉、魚(yú)肉、豬肝、牛奶等11類(lèi)食品，并明確“其它食品可參照?qǐng)?zhí)行"。

4. 凈化效果好：石墨化炭黑或C18固相萃取凈化設(shè)計(jì)，有效去除了色素、脂肪等復(fù)雜基質(zhì)干擾，保障了色譜柱壽命和檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

5. 填補(bǔ)標(biāo)準(zhǔn)空白：該標(biāo)準(zhǔn)是我國(guó)食品中吡啶類(lèi)農(nóng)藥殘留測(cè)定的專項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，為食品安全監(jiān)管提供了權(quán)威的技術(shù)依據(jù)。

6. 標(biāo)準(zhǔn)升級(jí)，強(qiáng)化監(jiān)管效力：從SN/T（推薦性行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)）升級(jí)為GB（強(qiáng)制性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)），檢測(cè)方法具有了法律強(qiáng)制力。

7. 服務(wù)國(guó)際貿(mào)易：吡啶類(lèi)農(nóng)藥是全球廣泛使用的農(nóng)藥品種，各國(guó)均設(shè)有嚴(yán)格的殘留限量要求。該標(biāo)準(zhǔn)的高靈敏度檢測(cè)能力，為我國(guó)食品出口貿(mào)易提供了有力的技術(shù)支撐。

十、注意事項(xiàng)

在實(shí)際應(yīng)用中，檢測(cè)人員需特別注意以下幾點(diǎn)：

1. 樣品基質(zhì)的多樣性：標(biāo)準(zhǔn)適用于植物源和動(dòng)物源兩大類(lèi)食品，基質(zhì)差異顯著。檢測(cè)人員應(yīng)根據(jù)樣品類(lèi)型選擇適當(dāng)?shù)那疤幚矸绞?/span>。

2. 凈化柱的選擇：對(duì)于色素含量高的樣品（如菠菜、茶葉），應(yīng)優(yōu)先選擇石墨化炭黑小柱進(jìn)行凈化；對(duì)于脂肪含量高的樣品（如豬肉、魚(yú)肉），可選用C18小柱。

3. 固相萃取柱的活化與平衡：小柱使用前應(yīng)按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定進(jìn)行活化和平衡，否則將影響凈化效果和目標(biāo)物回收率。

4. 無(wú)水硫酸鈉的預(yù)處理：無(wú)水硫酸鈉必須經(jīng)650℃灼燒4 h后使用，以去除吸附的水分和雜質(zhì)。

5. 濃縮過(guò)程的控制：氮吹濃縮時(shí)應(yīng)注意不要將樣品吹得過(guò)干，否則可能導(dǎo)致目標(biāo)物損失或難以復(fù)溶。

6. 試劑和用水質(zhì)量：必須使用GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水；乙腈、甲醇應(yīng)為液相色譜級(jí)。試劑中的雜質(zhì)可能影響色譜分離效果和質(zhì)譜檢測(cè)的靈敏度。

7. 色譜-質(zhì)譜條件的優(yōu)化：不同品牌和型號(hào)的LC-MS/MS儀器可能存在差異，檢測(cè)人員應(yīng)根據(jù)實(shí)際儀器狀態(tài)對(duì)色譜柱、流動(dòng)相、質(zhì)譜參數(shù)等進(jìn)行適當(dāng)優(yōu)化。

8. 基質(zhì)效應(yīng)的評(píng)估：食品基質(zhì)復(fù)雜，可能存在基質(zhì)效應(yīng)影響定量準(zhǔn)確性。建議采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量，以校正基質(zhì)效應(yīng)帶來(lái)的偏差。

9. 質(zhì)量控制：每批樣品分析時(shí)應(yīng)同時(shí)進(jìn)行空白試驗(yàn)和加標(biāo)回收試驗(yàn)，加標(biāo)回收率應(yīng)在70%～120% 之間。

10. 前處理效率的考量：標(biāo)準(zhǔn)方法的固相萃取前處理較為費(fèi)時(shí)。如實(shí)驗(yàn)室具備條件，可在充分驗(yàn)證的基礎(chǔ)上探索QuEChERS等簡(jiǎn)化前處理方案。

十一、總結(jié)

GB 23200.50-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中吡啶類(lèi)農(nóng)藥殘留量的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》以液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法為核心技術(shù)，通過(guò)乙腈提取-鹽析和固相萃取凈化的前處理策略，為大米、小麥、蔬菜、水果、茶葉、肉類(lèi)、乳制品等11類(lèi)食品中7種吡啶類(lèi)農(nóng)藥殘留量的同步測(cè)定提供了一套科學(xué)、規(guī)范、高靈敏度、高選擇性的分析方法。該標(biāo)準(zhǔn)由原國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委、農(nóng)業(yè)部、原食品藥品監(jiān)管總局聯(lián)合發(fā)布，代替SN/T 2561-2010，實(shí)現(xiàn)了從推薦性行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)向強(qiáng)制性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的升級(jí)。

吡啶類(lèi)農(nóng)藥作為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用的殺蟲(chóng)劑、殺菌劑和除草劑，其殘留問(wèn)題直接關(guān)系到食品安全和消費(fèi)者健康。該標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)布和實(shí)施，有效統(tǒng)一了食品中吡啶類(lèi)農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法，填補(bǔ)了我國(guó)相關(guān)領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)空白，為食品安全監(jiān)管和國(guó)際貿(mào)易提供了權(quán)威的技術(shù)支撐。

對(duì)于食品生產(chǎn)企業(yè)、檢測(cè)機(jī)構(gòu)和食品安全監(jiān)管部門(mén)而言，深入理解和正確應(yīng)用這一標(biāo)準(zhǔn)，不僅是滿足合規(guī)要求的必要前提，更是保障食品安全、維護(hù)消費(fèi)者健康權(quán)益、應(yīng)對(duì)國(guó)際貿(mào)易技術(shù)壁壘的重要技術(shù)手段。檢測(cè)人員應(yīng)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的操作步驟開(kāi)展檢測(cè)工作，特別注意固相萃取凈化的關(guān)鍵控制點(diǎn)、儀器條件的優(yōu)化和基質(zhì)效應(yīng)的校正，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。同時(shí)，鑒于標(biāo)準(zhǔn)方法前處理較為復(fù)雜的現(xiàn)實(shí)情況，檢測(cè)人員可關(guān)注QuEChERS等簡(jiǎn)化前處理技術(shù)的研究進(jìn)展，在充分驗(yàn)證的基礎(chǔ)上提升檢測(cè)效率。